作者：李国辉　姚航平　李志会方

【关键词】  T细胞表达;分泌因子;单核细胞趋化蛋白1;类风湿关节炎

    ［摘要］ 目的研究类风湿关节炎（RA）患者血清、关节滑液中调节活化正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达水平，探讨其在RA致病中的作用。方法用酶联免疫吸附法（ELISA）测定27例类风湿关节炎患者血清及病变膝关节滑液中RANTES、MCP-1水平，并与外伤截肢者对照。结果 RA患者血清及滑液中RANTES、MCP-1水平明显高于对照组，且RA滑液中RANTES水平高于血清。结论以上研究结果提示RA病变关节组织是RANTES产生的主要部位。
   
　　［关键词］ T细胞表达;分泌因子;单核细胞趋化蛋白1;类风湿关节炎
   
　　Expression of RNATES，MCP-1in serum and synovial fluid in patients with rheumatoid arthritis     
　　［Abstract］ Objective To investigate the expression of activation normal T cell expressed and secreted（RANTES）and monocytechemoattracta protein1（MCP-1）in serum and synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis（RA）and to identify its pathological role in RA.Methods The serum and synovial fluid of the pathologic knee joints were obtained from patients with RA，and samples from leg traumatic amputees were used as the control group.Levels of RANTES and MCP-1protein in serum and synovial fluid were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.Results Levels of RANTES，MCP-1protein in both serum and synovial fluid of patients with RA were significantly higher com-pared with corresponding samples of the control group.In addition，the expression of RANTES protein in synovial fluid was also markedly increased compared with that in serum of patients with RA.Conclusion All the results suggest that the pathological arthrosis are the main positions to produce RANTES.
   
　　［Key Words］ RANTES;MCP-1;rheumatoid arthritis;

　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的病理特点为大量炎性细胞在滑膜的浸润和在滑液的渗出，滑膜增生、血管翳形成，及由此造成的软骨破坏。研究发现趋化因子在RA关节的炎性细胞关节浸润中起着极为重要的作用  ［1］ 。调节活化正常T细胞表达和分泌因子（regulated on activation normal T cell expressed and secreted，RANTES）及单核细胞趋化蛋白1（monocytechemoattracta protein1，MCP-1）均为炎症 性趋化因子，具有调节T淋巴细胞分化的功能。在炎症条件下，MCP-1和RANTES增多能募集包括活化的效应T淋巴细胞进入组织的炎症损伤部位执行免疫应答功能 ［2］ 。本研究对RA患者血清和病变膝关节滑液中RANTES和MCP-1水平进行检测，并与外伤截肢者对照，旨在探讨其在RA发病中的作用。
   
　　1材料和方法

    1.1研究对象

　　实验组血清及膝关节滑液取材于2002年至2005年杭州市红十字会医院及浙江大学医学院附属第一医院风湿科初诊RA病人，共27例，均符合1987年美国风湿病协会修订的类风湿关节炎诊断标准。对照组血清及膝关节滑液均来源于以上两家医院因外伤截肢患者（一般检查均正常）共18例。

    1.2标本收集抽取空腹外周静脉血5ml，以2500r/min离心15min，取上清，置于-20℃备检。细针抽取关节滑液2ml，置于-80℃备检。
   
　　1.3RANTES及MCP-1的检测方法

　　RANTES及MCP-1的检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA），操作按照R&D试剂盒（RNATES cat#DY278，MCP-1cat#DY279）说明书进行。其主要步骤为:分别向包被鼠抗人RANTES单抗和MCP-1单抗的微孔内加入50μl的RANTES、MCP-1标准品或检测血清、按1:3稀释的关节滑液，将96孔板盖上薄膜置于室温中孵育2h，孵育后洗涤3次。分别加入50μl酶联复合物，显色，全自动酶标仪分别读取RANTES及MCP-1浓度，标本均行复孔检测，均值为终浓度。

    1.4统计学处理

　　数据以 χ ±s表示，两组间比较采用SPSS11.0统计软件作t检验。P<0.05为结果差异有统计学意义。

    2结果

    2.1 RA及对照组血清及滑液RANTES水平的比较 RANTES检测结果见表1，从表1可见RA患者血清及关节滑液RNATES的水平显著高于对照组，且RA组内关节滑液中的含量较血清中明显升高，差异具有统计学意义（P<0.01）。
   
　　2.2RA及对照组血清及滑液MCP-1水平的比较MCP-1检测结果见表1，RA患者血清及关节滑液MCP-1的水平高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.01），但RA组内关节滑液中的MCP-1含量与血清比较差异无统计学意义。表1血清及滑液RANTES、MCP-1的水平（略）注:组内滑液与血清水平比较， * P<0.01;对照组比较， # P<0.01

　　3讨论

    趋化因子是对白细胞起特异性趋化吸引作用的小分子细胞因子，按其N2端半胱氨酸残基的相邻位置，可将趋化因子分为4个亚族，既CXC、CC、CX3C和C亚族趋化因子 ［3］ 。其中CXC和CC亚族趋化因子为最常见的2个亚类，CC亚族趋化因子的前2个 半胱氨酸相互紧邻，这类趋化因子主要有RANTES、MCP1及MIP-1a、MIP-1β等，它们主要对单个核白细胞等起趋化作用 ［4］ 。

    RA是一种病变部位以CD4+的Thl细胞浸润为主的自身免疫性疾病，其临床表现以关节滑膜炎和可累及全身各个器官的血管炎症病变为特征。有研究证实， ［5，6］ RANTES通过与细胞表面相应的CC亚族趋化因子受体（CCR1、CCR3和CCR5）结合，特异吸引CD4+/CDRO45+T细胞进入炎性部位，并对嗜碱和嗜酸粒细胞具有激活作用，而在免疫及炎性反应、HIV感染等方面起着极为重要的作用。而MCP-1受体CCR2是一类表达于不同类型细胞（单核细胞、记忆T淋巴细胞、嗜碱性白细胞等）上的含有7个跨膜区的G蛋白偶联受体MCP-1与CCR2结合后，受体变构并与G蛋白结合，激活信号转导通路，发挥生物学作用，使各种炎性细胞尤其是单核细胞向病变部位聚集。近年来，大量研究表明MCP-1在治疗炎症疾病、免疫疾病中发挥了重要的作用，已经成为人们治疗这些疾病的新的靶点。

    本文通过采用ELISA方法检测RA患者血清及关节液的RANTES、MCP-1水平，并与外伤截肢者对照，结果发现RA患者血清和滑液中RANTES、MCP-1水平均显著高于对照组，且RA患者关节液RANTES水平升高更为明显（P<0.01）。而RA患者血清MCP-1水平与滑液相比，差异无统计学意义（P>0.05）。
    由于RANTES在RA患者外周单个核白细胞的表达与正常人无差异  ［6］ ，本实验中RA患者关节液RANTES水平升高与血清相比更为明显，提示RA患者血清增高的RANTES主要来自于病变关节部位。以上结果也进一步表明患者血清及滑液中MCP-l和RANTES水平的升高、RA患者血清MCP-1水平与滑液相比差异无显著性可能与其体内Th1/Th2细胞比例失衡及炎症部位Th1细胞浸润有关。

    总之，类风湿关节炎是一种慢性炎症性疾病，最终发展至软骨破坏及骨侵蚀，上述病理过程的发生发展目前认为与血液中单核及淋巴细胞浸润滑膜组织有关  ［7］ 。相关研究表明单核及淋巴细胞表面存在多种趋化因子受体，而关节局部可产生多种高浓度趋化因子，依浓度梯度可趋化单核及淋巴细胞进入关节滑膜组织  ［8］ ，浸润于滑膜组织的细胞在激活状态下又可分泌多种细胞因子其中也包括大量的趋化因子 ［9］ ，如MCP-1、MIP-1a、MIP-1β、RANTES等，它们之间的相互作用可进一步增加炎症细胞在滑膜组织中的浸润，从而使炎症反应周而复始的发生。结合本实验结果，提示MCP-1、RANTES在RA的发生、发展中均起着重要作用。
   
　　参考文献

    1Szekanecz Z，